EMB agar: kuruluş, hazırlık ve kullanım
EMB agar, özellikle Enterobacteriaceae familyasından ve diğer talepkar olmayan Gram negatif basillerden Gram negatif basillerin izolasyonu için kullanılan seçici ve farklı bir katı kültür ortamıdır. Aynı zamanda, eozin-metilen mavisi anlamına gelen EAM kısaltması tarafından da bilinir.
Bu ortam 1916'da Holt-Harris ve Teague tarafından yaratılmıştır. Pepton, laktoz, sakaroz, dipotasyum fosfat, ağar, eozin, metilen mavisi ve su içerir. MacConkey agarına çok benziyor, özellikle Levine tarafından modifiye edilmiş EMB agarı kullanılırsa, sukroz içermez.
Aslında, her bir laboratuvar biyokimyasal olarak farklı olsalar da aynı işlevi yerine getirdikleri için birbirleriyle ya da başkaları ile çalışıp çalışmadıklarına karar verir.
Proteus cinsinden kaynaşma üretimi açısından klasik MacConkey agar ile aynı dezavantajı bile sunmaktadır. Bu nedenle, bu fenomenden kaçınmak için agar konsantrasyonu% 5'e kadar artırılabilir.
vakıf
selektif
EMB agarı, seçici olarak seçicidir çünkü çoğu Gram pozitif bakteri ve bazı zorlu Gram negatif basillerin çoğalmasını önleyen, inhibitör olarak işlev gören anilinik boyaları (eozin ve metilen mavisi) içerir.
Bununla birlikte, bu agar, bazı Gram pozitif bakterilerin inhibe edici maddelerin varlığına karşı koyabilmeleri ve Enterococcus faecalis ve bazı Staphylococcus gibi küçük, renksiz, nokta şeklinde koloniler halinde büyümesi dezavantajına sahiptir.
Candida albicans kompleksi gibi çok küçük pembe koloniler verecek mayaları da yetiştirebilirsiniz. Ayrıca, numune derinlikte ekilirse, bu mayadan klamidosporlar geliştirilebilir.
diferansiyel
Öte yandan, EMB agar aynı zamanda farklı bir ortamdır, çünkü bu boyalar bir arada (eozin ve metilen mavisi) asidik pH'da bir çökelti oluşturma özelliğine sahiptir, bu nedenle üretiminin bir göstergesi olarak kullanılırlar.
Bu nedenle, zayıf fermente laktoz veya sukroz bakterileri 24 ila 48 saat içinde mor koloniler oluşturur. Örneğin, Klebsiella, Enterobacter ve Serratia cinsleri.
Escherichia coli gibi laktozu veya Yersinia enterocolitica veya Proteus penneri gibi sakarozu kuvvetle fermente eden bakteriler, bu türlerde karakteristik bir metalik parlaklık veren yeşilimsi siyah bir çökelti oluşturur.
EMB levine besiyeri (sakroz olmadan) kullanılırsa, Yersinia enterocolitica ve Proteus penneri'nin temiz koloniler üreteceği belirtilmelidir.
Laktoz veya sakaroz fermente etmeyen bakteriler, bakteriyel gelişim için gerekli olan amino asitleri ve nitrojeni sağlayan ve berrak koloniler üreten peptonların varlığı ile beslenir. Örneğin, Salmonella ve Shigella cinsleri, diğerleri arasında.
Aynı şekilde, Acinetobacter cinsinin laktoz fermentörü olmasa da sakaroz lavanta kolonileri sunabileceğini, ancak hücre duvarında metilen mavisini sabitleme özelliğine sahip olduğunu not etmek önemlidir. Bu, diğer oksidatif bakterilerde de olabilir.
hazırlık
Orijinal kurutulmuş ortam açık bejdir.
Bu kültür ortamını hazırlamak için, 36 gram susuz ortam, tartılmalı ve bir litre damıtılmış su içeren bir şişe içinde süspansiyon haline getirilmelidir.
Karışımı 5 dakika dinlendirdikten sonra fiolaları bir ısı kaynağına getirin, kaynayana ve tamamen eriyene kadar kuvvetlice ve sürekli karıştırın.
Daha sonra, hali hazırda çözünmüş kültür ortamı, otoklav kullanılarak 121 ° C'de 15 dakika süreyle sterilize edilmelidir.
Zamanın sonunda, otoklavdan çıkarılır ve kısa bir süre dinlenmeye bırakılır. Daha sonra her steril petri kabında 15 ila 20 ml agar arasında bile sıcak (45 - 50 ° C) servis edilir. Orta mavi litmus olmalıdır.
Servisten sonra plakalar biraz soğuyana kadar hafifçe açığa çıkarılır. Sonra örtülür ve tamamen katılaşmaya bırakılır. Daha sonra ters bir plak tutucuda sipariş edilir ve kullanılana kadar buzdolabında (8 ° C) saklanır.
Bu prosedür tercihen kirlenmeyi önlemek için laminer akış kaputu veya Bunsen brülörünün önünde yapılır.
Her ticari evin kültür ortamını hazırlamak için tartılacak miktarı göstereceğini akılda tutmak önemlidir.
Ortamın nihai pH değeri 7.2 ± 0.2 olmalıdır
uygulamaları
Bu besiyeri, idrar ve dışkı veya herhangi bir klinik numunenin ekilmesi için kullanılır, özellikle bu besiyerinde çok iyi yetişen Enterobacteriaceae familyasına ait olan bacalar gibi zorlu olmayan Gram negatif basillerin varlığından şüphelenilirse.
Shigella ve Salmonella cinslerinin enteropatojenik bakterileri renksiz veya hafif amber renkli kolonileri ile ayırt edilir.
Diğer fermente olmayan laktoz basilleri, Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter gibi, diğerleri arasında da büyür.
Benzer şekilde, bu ortam, gıda ve suyun mikrobiyolojik analizinde çok faydalıdır, çünkü koliformların belirlenmesinin tam doğrulayıcı aşaması için, yani, türbid EC çorbalarından E. coli'nin varlığını doğrulamak için idealdir. En muhtemel sayı tekniği (NMP).
Kalite kontrol
Yeni hazırlanan kültür ortamının iyi çalıştığını doğrulamak için kolonilerin özelliklerini gözlemlemek ve beklendiği gibi uygun olduklarını doğrulamak için kontrol suşları ekilebilir.
Bunun için ATCC suşları veya E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ve S. aureus gibi bazı Gram pozitif bakterilerin iyi tanımlanmış suşları kullanılabilir .
E. coli'nin yeşil metalik parıltılı iyi gelişmiş mavimsi siyah koloniler üretmesi beklenmektedir. Oysa Enterobacter aerogenes ve Klebsiella sp, iyi gelişmiş mavimsi siyah mukoza kolonileri vermelidir.
Öte yandan, Salmonella typhimurium ve Shigella flexneri, renksiz veya hafif amber renginde büyük koloniler geliştirmelidir.
Son olarak, Pseudomonas aeruginosa cinsi düzensiz büyüklükte renksiz koloniler olarak büyür, oysa Gram-pozitif bakteriler tamamen inhibe edilmeli veya çok küçük kolonilerde az miktarda büyümelidir.
Son düşünceler
Bazen sterilizasyon, turuncu bir ortamı gözlemleyerek metilen mavisinin azalmasına neden olur. Metilen mavisinin oksitlenmesi ve mor rengin geri kazanması için, renk iyileşene kadar hafifçe karıştırılmalıdır.
Ayrıca, sterilizasyondan sonra boya çökelebilir, bu nedenle Petri tabaklarına servis yapmadan önce iyice karıştırılmalıdır.
